Isoniazida 245

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Las características de unión de la isoniazida con la superóxido dismutasa copperzinc y su efecto sobre la actividad enzimática Resumen Antecedentes La isoniazida (INH) es medicamentos de primera línea contra la tuberculosis (TB), que por lo general se prescriben a los pacientes con tuberculosis durante un periodo total de 6 meses. hepatotoxicidad inducida por fármacos antituberculosis (ATDH) es una reacción adversa grave del tratamiento de la tuberculosis. Se ha informado de que la hepatotoxicidad inducida por INH está asociada con el estrés oxidativo. La superóxido dismutasa (SOD, EC 1.15.1.1) es la enzima clave para la protección del estrés oxidativo, que cataliza la eliminación de anión radical superóxido, aumentando así la necesidad de comprender mejor la interacción entre INH y SOD. Resultados Los resultados experimentales mostraron que la intensidad de fluorescencia de Cu / Zn-SOD disminuyó regularmente debido a formar un complejo 1: INH-SOD 1. De acuerdo con las constantes de asociación correspondientes (K SV) entre INH y SOD obtenida de trama SternVolmer, se muestra que los valores de KA son 1,01 10 5,31 10 4. 3. 3.33 10 2.20 10 3. 3 L mol 1 a cuatro temperaturas diferentes, respectivamente. Se calcularon las constantes de unión, sitios de unión y los correspondientes parámetros termodinámicos (H. G y S). Un valor de 3,93 nm para la distancia media entre INH y cromóforo de Cu / Zn-SOD se deriva de la teoría de Förster de transferencia de energía no-radiación. La investigación conformacional mostró que la presencia de INH resultó en el microambiente y conformacionales cambios de Cu / Zn-SOD. Además, los efectos de INH en la actividad de la superóxido dismutasa se examinó. Conclusiones Los resultados muestran que los enlaces de hidrógeno y fuerzas de van der Waals juegan un papel importante en la estabilización del complejo 1: INH-SOD 1. Después de la adición de INH durante el intervalo del experimento, la conformación y microambiente de Cu / Zn-SOD se cambian, pero la actividad de Cu / Zn-SOD no se cambia. Palabras clave superóxido dismutasa Interacción isoniazida antioxidación Antecedentes La tuberculosis (TB) es una de las principales causas de muerte debido a una enfermedad única, que representa hasta 2 millones de vidas cada año 1. Isoniazida (INH) es el antibiótico de primera línea más importante utilizado para tratar la tuberculosis, que sigue siendo la piedra angular de todos los regímenes antituberculosos y sigue siendo el único agente recomendado para la quimioprofilaxis de tuberculosis para los niños 2. A pesar de numerosos estudios e intensivos, tenemos un conocimiento limitado del mecanismo de acción del INH 3 6. La opinión de consenso es que en presencia de un flujo lento de H 2 O 2 o superóxido, KatG convierte INH en una especie de radical que se acopla posteriormente a NADH para formar un INH-NAD (P) aducto. El aducto INH-NAD es un potente inhibidor de Mtb InhA, una reductasa enoil necesario para los pasos de elongación en la biosíntesis de ácidos micólicos 7. 8. Recientemente se ha sugerido que la reactividad superóxido afecta a la actividad antituberculosa de INH en cierta medida, y con ello aumenta las necesidades de entender mejor la interacción entre INH y superóxido 9. Por otra parte, al aumentar la frecuencia de la enfermedad en todo el mundo, un número creciente de pacientes pueden estar en riesgo de reacciones severas adversas a los medicamentos (RAM) como antituberculoso hepatotoxicidad inducida por fármacos (ATDH) cuando son tratados con quimioterapia antituberculosa 10. 11. ATDH puede ser fatal si no se reconoce en una etapa temprana, después de lo cual debe interrumpir el tratamiento oportuno. Por otra parte, ATDH tiene un impacto negativo sobre la adherencia terapéutica, disminuye las tasas de éxito del tratamiento y, finalmente, aumenta el fracaso del tratamiento, recaída o la aparición de resistencia a los medicamentos. La aparición de la hepatotoxicidad relacionada con INH ha sido bien definida por 12 y se muestra para aumentar como resultado de la farmacocinética fármaco-fármaco o interacciones farmacodinámicas 13. En general se reconoce que la hepatotoxicidad inducida por la INH se asocia con el estrés oxidativo 14. Superóxido dismutasa (SOD, EC 1.15.1.1) es una enzima antioxidante en animales, plantas, hongos y bacterias, que cataliza la eliminación de anión radical superóxido (O 2) a peróxido de hidrógeno (H 2 O 2) que se puede convertir posteriormente agua por la enzima catalasa 15. 16. Por lo tanto, es la enzima clave para la protección del estrés oxidativo y podría ser un fármaco candidato adecuado para proteger el hígado de ATDH 17 19. Para comprender mejor el mecanismo de protección de SOD, la interacción entre SOD y INH debe ser investigada. Proteindrug interacción es un tema candente en los campos de la medicina, la química y la biología. Además, debido a los efectos sobre la farmacocinética de la droga cuando delimitada a la proteína, hay un creciente interés en las proteínas de perspectivas clínicas y farmacéuticas 20 22. Además, la unión de los fármacos a las proteínas in vitro se considera como un modelo en la química de proteínas para estudiar el comportamiento de unión de la proteína. En consecuencia, la investigación de la unión entre las drogas y la SOD es de fundamental importancia en farmacología y farmacodinamia. Además, el análisis de la interacción entre SOD y moléculas de fármaco pequeñas es interesante, en cierta medida, debido a la unión de moléculas pequeñas específicas para SOD sólo se ha caracterizado en detalle para algunos ejemplos 23. 24. En este trabajo, la interacción entre el INH y Cu / Zn-SOD se ha investigado con fluorescencia y espectroscopia ultravioleta. Se obtuvieron la distancia mecanismo de unión, las constantes de unión, los sitios de unión y vinculante. La naturaleza de la fuerza de unión se analizó en base a los parámetros termodinámicos. Además, los efectos de INH en la conformación de Cu / Zn-SOD se examinaron por fluorescencia sincrónica y la espectroscopia de fluorescencia tridimensional. Lo que es más, también se exploraron los efectos de INH sobre la actividad de Cu / Zn-SOD. Esperamos que este trabajo puede proporcionar información útil para la farmacología de INH. Resultados y discusión Efectos de INH en la fluorescencia de Cu / Zn-SOD La fluorescencia de Cu / Zn-SOD proviene del triptófano, tirosina y fenilalanina 25 residuos. Con 280 nm de longitud de onda de la excitado, el pico máximo de emisión de Cu / Zn-SOD podría lograrse a 306 nm 26. La Figura 1 muestra los espectros de fluorescencia de Cu / Zn-SOD después de la adición de INH. Obviamente, con el aumento de la concentración de INH, la intensidad de fluorescencia disminuye regularmente, pero sin significativa la posición de desplazamiento. La fuerte enfriamiento de la fluorescencia indica claramente que la interacción entre INH y Cu / Zn-SOD cambió el microambiente de cromóforo o la estructura terciaria de Cu / Zn-SOD. espectros de fluorescencia de SOD en presencia de diversas concentraciones INH a 299 K (pH 7,4, ex 280 nm). c (SOD) 4.0 10 6 1 mol L c (INH) / (10 5 mol L 1), 16: 0, 0.8, 1.6, 2.4, 3.2, 4.0, respectivamente. El mecanismo de extinción de la fluorescencia de Cu / Zn-SOD por INH extinción de la fluorescencia se refiere a cualquier proceso que disminuyen la intensidad de fluorescencia de una muestra tal como reacciones en estado excitado, transferencias de energía, la formación de complejos del estado fundamental y el proceso de colisión 27. Mecanismos de enfriamiento se suelen dividir en temple dinámica y estática de temple 27. Diferentes mecanismos de enfriamiento se pueden distinguir por su diferente dependencia de la temperatura y del estado excitado tiempo de vida. A medida que las temperaturas más altas podrían dar lugar a coeficientes de difusión de mayor tamaño, se espera que las constantes de enfriamiento dinámicos a ser más grandes con un aumento de la temperatura. Por el contrario, el aumento de temperatura es probable que resulte en una disminución de la estabilidad de los complejos de este modo, se espera que los valores de las constantes de extinción estáticos a ser más pequeños. En el presente trabajo, los espectros de fluorescencia de extinción de Cu / Zn-SOD con presencia de diferentes concentraciones de INH a cuatro temperaturas diferentes (las temperaturas utilizadas fueron 292, 295, 299 y 303 K) se midieron. La extinción de la fluorescencia se analizó por lo general por la ecuación SternVolmer conocido 28. 29: F 0 / F 1 K SV Q 1 K q 0 Q donde F 0 y F son las intensidades de fluorescencia de Cu / Zn-SOD en ausencia y presencia de el extintor (INH), respectivamente, K q es la constante de velocidad de enfriamiento, K SV es la constante de SternVolmer, 0 es el tiempo de vida media de la molécula sin extintor y la vida de la fluorescencia del biopolímero es de 10 8 s, Q es el extintor concentración. La figura 2 muestra los gráficos de Stern-Volmer de la Cu / Zn-SOD extinción de la fluorescencia por INH. Los valores de K SV obtenidos de la decantación de las parcelas son 5.06 10 4.45 10 3. 3. 10 3,89 3,41 3 y 10 L 3 moles 1. respectivamente. Es evidente que los valores de K SV están inversamente correlacionados con la temperatura (inserción en la Figura 2), y K q es mucho mayor que el valor de la colisión máxima dispersión de enfriamiento constante (2,0 10 10 L mol 1 s 1), lo que indica la mecanismo estático de temple y revela que la extinción de la fluorescencia es causada por la interacción específica y la formación de complejos entre las moléculas de Cu / Zn-SOD y INH 27. parcelas Stern-Volmer para el enfriamiento rápido de SOD por INH a cuatro temperaturas diferentes, (pH 7,4). Recuadro: K SV - T. Cálculo de los parámetros de unión para atenuación estática, se utilizó la siguiente ecuación para calcular las constantes sitios de unión y de unión 30. 31: log F 0 F F log K A n log Q donde F 0. F y Q son los mismos que en la ecuación (1), KA y n son la constante de unión y el número de sitios de unión, respectivamente, KA y n puede ser obtenido a partir de las gráficas de log (F 0 - F). / F vs. LOGQ para el sistema INHSOD a cuatro temperaturas. Los resultados calculados se muestran en la Tabla 1. Los resultados muestran que K A disminuye con el aumento de la temperatura, lo que probablemente indica la formación de un compuesto se descompone parcialmente a temperaturas más altas. El valor de n es igual a aproximadamente 1, lo que indica la implicación de un solo sitio de unión en la interacción INHSOD. Los parámetros de unión, número de sitios y parámetros termodinámicos de INHSOD a cuatro temperaturas de unión a fin de confirmar el mecanismo de temple probable de Cu / Zn-SOD por INH, los espectros de absorción de Cu / Zn-SOD en presencia y ausencia de INH en 303 K se registraron y se presenta en la Figura 3. Como se ve en la figura 3. con la adición de INH el pico de absorbancia alrededor de 213 nm, que se debe principalmente a la transición - de enlaces peptídicos en SOD disminuyó regularmente con el pico de desplazamiento al rojo (de 213 a 220). De este modo, posiblemente se forma el complejo estado fundamental entre SOD y INH. El pico de absorbancia causado por la transición - se desplazada al rojo con el aumento de la polaridad del disolvente, por lo que podemos llegar a una conclusión que se altera la polaridad del microambiente de la SOD, lo que lleva a un cambio conformacional que las hebras de péptidos de SOD se extienden y su hidrofobicidad disminuye 28. 30. 31. UV-Vis espectros de absorción de SOD en ausencia y en presencia de sistema de INH (pH 7,4, T 303 K). c (SOD) 4.0 10 6 1 mol L c (INH) / (10 5 mol L 1). 17: 0, 2, 4, 8, 12, 16, 20, respectivamente. Insertar: (A 0 - A) 1 vs. Q 1. Según la literatura 32. 33, cuando uno molécula orgánica pequeña se une a la macromolécula biológica, la relación entre la intensidad de la absorbancia de macromoléculas biológicas y la pequeña concentración de la molécula orgánica se puede escribir como sigue: A 0 A 1 A 0 1 KA 1 A 0 1 Q 1 en la que A 0 y A son las intensidades de absorbancia de Cu / Zn-SOD en ausencia y presencia de la INH, respectivamente, KA y Q son la concentración constante y INH de unión. Como se muestra en el recuadro en la figura 3. parcela de 1 / (A 0 - A) contra 1 / Q da una línea recta, el coeficiente de correlación de 0,9986, que es y la constante de unión (KA) es igual a 2,32 10 3 L mol 1. Los resultados demuestran además que sólo una molécula de INH se une Cu / Zn-SOD. análisis termodinámico y intermoleculares fuerzas las fuerzas intermoleculares de interacción entre las moléculas pequeñas y biomoléculas incluyen principalmente enlaces de hidrógeno, fuerzas de van der Waals, fuerzas electro estáticas y fuerzas hidrofóbicas. Dentro de un pequeño intervalo de temperatura, la entalpía de interacción puede ser considerado como una constante que conduce a las siguientes ecuaciones 34. 35: ln KA 2 / KA 1 H 1 / T 1 1 / T 2 / RGHTSSGH / T donde R es la constante de los gases , T es la temperatura absoluta y KA es la constante de unión aparente en correspondiente temperatura T. Si S 0, lo que indica que la interacción entre INH y Cu / Zn-SOD se debe principalmente a los enlaces de hidrógeno y fuerzas de Van der Waals 34. 35. La transferencia de energía entre Cu / Zn-SOD y INH La transferencia de energía en la bioquímica es importante, debido a que la eficiencia de la transferencia se puede utilizar para evaluar la distancia entre el ligando y el cromóforo en proteínas. La superposición del espectro de absorción UVVis de INH con el espectro de emisión de fluorescencia de Cu / Zn-SOD, como se muestra en la Figura 4. De acuerdo con la teoría de transferencia de energía no radiante Förster, la eficiencia de transferencia de energía es E. la distancia crítica para la transferencia de energía es 50 R 0. y la distancia real de la separación es r. Estos valores se calcularon mediante las ecuaciones. (7, 8, 9) 35 37: E 1 FF 0 R 0 6 R 0 6 R 6 R 0 6 8,8 10 25 K 2 N 4 J donde r es la distancia desde el ligando al cromóforo de la proteína, y R 0 es la distancia crítica Förster en el que 50 de la energía de excitación se transfiere al aceptor. J F 4 F donde F () es la intensidad de fluorescencia del donante en el rango de longitud de onda, y () es el coeficiente de absorción molar del aceptor en longitud de onda. En este caso, K 2 2/3, N 1.336 y 0,13 36. De acuerdo con la ecuación (7), (8), (9), podríamos calcular que J 2,3 10 13 cm 3 L mol 1. E 0.022, R 0 2,58 nm, y r 3,93 nm. La distancia de unión entre el INH y Cu / Zn-SOD es más corto que 7 nm, lo que indica que la transferencia de energía de Cu / Zn-SOD a INH se produce con alta posibilidad 35 37. También se sugiere que la unión de INH de Cu / Zn-SOD se lleva a cabo a través de transferencia de energía, lo cual es consistente con un mecanismo de atenuación estática. solapamiento espectral de espectro de absorción UV-Vis de INH (a) con el espectro de emisión de fluorescencia de SOD (b). c (SOD) c (INH) 4.0 10 6 mol de L-1 (pH 7,4, T 303 K). investigación Conformación de Cu / Zn-SOD La influencia de INH en los cambios conformacionales de Cu / Zn-SOD se evaluó mediante fluorescencia sincrónica. medición de fluorescencia sincrónica proporciona información sobre el microambiente molecular en el entorno de los grupos funcionales fluoróforo 38. Cuando el cambio de longitud de onda () entre las longitudes de onda de emisión y de excitación se estabilizó en 20 o 80 nm 39, la fluorescencia sincrónica presenta la información característica de los residuos de tirosina o triptófano, respectivamente. Figura 5 A y la Figura 5 B muestran los efectos de INH en la fluorescencia sincrónica de Cu / Zn-SOD. Como se ve en la figura 5. La intensidad de fluorescencia de residuo residuo tirosina y triptófano disminuyó con el aumento de la concentración de INH. La longitud de onda de emisión máxima de residuos de tirosina no se somete a un cambio significativo en el rango de concentración investigado. En contraste, se observó un desplazamiento hacia el rojo obvia para residuos de triptófano, lo que indica que la polaridad alrededor de los residuos de triptófano aumentado. En otras palabras, los residuos de triptófano se colocaron en un ambiente menos hidrófoba y estaban más expuestos al disolvente. Los espectros de fluorescencia sincrónica de SOD (pH 7,4, T 299 K). Un 20 nm, 80 nm B. c (SOD) 4,0 10 6 mol L 1 c (INH) / (10 5 mol L 1) 16: 0, 4, 6, 8, 10, 12, respectivamente. En los últimos años, la técnica de fluorescencia tridimensional ha sido ampliamente utilizado, ya que permite características de fluorescencia para ser adquiridos por el cambio de las longitudes de onda de excitación y emisión de forma simultánea. Estudiamos los cambios conformacionales y microambientales de Cu / Zn-SOD mediante la comparación de los cambios espectrales en la ausencia y presencia de INH, como se muestra en la Figura 6. En estas figuras, el pico a es el pico de dispersión de Rayleigh (ex em), el pico intensidad de que aumentó con la adición de INH. Una explicación razonable podría ser que un complejo de INH-SOD formado después de la adición de INH, aumenta el diámetro de la macromolécula, y por lo tanto mejora los efectos de dispersión 40. El pico B es la ordenada segunda dispersión de pico (2 ex em). Pico 1 (ex 280,0 nm, em 306,0 nm) revela principalmente el comportamiento espectral de los residuos de Trp y Tyr desde excitación de SOD en esta longitud de onda revela principalmente su fluorescencia intrínseca, y la fluorescencia del resto de fenilalanina puede ser insignificante 25. Además de pico 1, hay otro pico fuerte fluorescencia (pico 2, ex 232,0 nm, em 306,0 nm), que exhibe principalmente el comportamiento espectral de fluorescencia de las estructuras de cadena principal del polipéptido 40. Ambos picos estaban involucrados en extinción de la fluorescencia de Cu / Zn-SOD por INH en diferentes grados. Mediante el análisis de los cambios de intensidad de pico 1 y el pico 2, en ausencia y presencia de INH, la relación de intensidad de fluorescencia de pico a pico 1 2 es 1,16: 1 y 1,18: 1, respectivamente. Todos estos fenómenos y análisis revelaron que la unión del INH de SOD inducida por algunos cambios microambientales y conformacionales en Cu / Zn-SOD. Los espectros de fluorescencia tridimensional de SOD (A) y el sistema de INHSOD (B) (pH 7,4, T 299 K). A c (SOD) 4.0 10 6 mol L 1. c (INH) 0 B c (SOD) 4.0 10 6 mol L 1. c (INH) 4.0 10 5 mol L-1. Efectos de INH en la actividad / Zn-SOD Cu La actividad de Cu / Zn-SOD después de la adición de INH se estudió para investigar los efectos de INH sobre la actividad de la superóxido dismutasa. Figura 7 A muestra la relación entre el efecto antioxidante de INH-SOD y la concentración INH. Figura 7 b muestra la relación entre el efecto antioxidante de INH disociativa y su concentración. Debido a efecto antioxidante de INH en el rango del experimento, la antioxidación de INH-SOD se fortaleció con la concentración creciente INH. La actividad enzimática se determina restando el efecto antioxidante de INH de efecto antioxidante de INH-SOD (Figura 7 C). Los resultados muestran que la actividad enzimática es casi el mismo durante todo el experimento. La observación conduce a la conclusión de que el INH no afecta a la actividad de la Cu / Zn-SOD. Efecto de INH en la actividad de la superóxido dismutasa (SOD) (pH 7,4, T 303 K). un efecto antioxidante de INH-SOD, b efecto antioxidante del INH, C la actividad enzimática relativa de SOD. Experimental Materiales Cu / Zn-SOD se adquirió de la empresa Doulai Biotecnología (Nanjing, China), INH fue adquirido de Taizhou Medical Corporation (Zhejiang, China). SOD se disuelve directamente en agua bidestilada para preparar la solución madre (0,12 mM), y la solución madre se mantuvo en la oscuridad a 04C. solución INH se obtuvo disolviendo en agua bidestilada (1,2 mM). Se preparó solución tampón 0,05 M Tris-HCl de pH 7,4 y 8,2. Otros reactivos son productos locales de calidad analítica. El agua utilizada fue bidestilada y libre de iones. Las mediciones de fluorescencia se llevaron a cabo en cubetas de cuarzo de 1,0 cm en un espectrofotómetro FluoroMax-4 (Horiba, Japón) equipado con un baño de termostato. UVvis espectros se registraron en un espectrofotómetro 8000A (Beijing Purkinje General Corporation, China). Todas las mediciones de pH se hicieron usando un pH-metro digital de PHS-3 (Chengdu Sanke Instrument Corporation, China) con un electrodo de vidrio combinado. Ensayo A 3,0 ml Tris HCl (pH 7,4, 0,05 M) solución tampón que contiene 4 M SOD se valoró por adiciones sucesivas de una solución de 1,2 INH mM y la concentración de INH varió de 0 a 40 M. Las valoraciones se realizaron manualmente mediante el uso de los microinyectores. Después de reaccionar durante 10 min, los espectros de fluorescencia se midieron en el intervalo de 290 450 nm en la longitud de onda de excitación de 280 nm. Los espectros de fluorescencia se realizaron a cuatro temperaturas (292, 295, 299 y 303 K). Las rendijas de excitación y emisión fueron de 5 nm. Los espectros de fluorescencia síncronos se registraron a 299 K a partir de 260 nm a 350 nm (para los residuos de tirosina) a 20 y 280 a 400 en 80 nm (para residuos de triptófano). Las rendijas de excitación y emisión were10 nm. espectros de fluorescencia tridimensional de SOD se registraron a 299 K en presencia y ausencia de INH con una longitud de onda de excitación en el rango de 230 300 nm y una longitud de onda de emisión en el rango de 260 500 nm. Las rendijas de excitación y emisión fueron de 5 nm. A 3,0 ml de Tris HCl (pH 7,4, 0,05 M) solución tampón que contiene 4 M SOD se valoró por adiciones sucesivas de una solución de 1,2 INH mM y la concentración de INH varió de 20 a 200 M. Las valoraciones se realizaron manualmente mediante el uso de los microinyectores. Después de la reacción durante 10 minutos a 303 K, espectros de absorción de SOD-INH se registraron en el intervalo de 190 400 nm. La actividad de la Cu / Zn-SOD se ensayó mediante el método de autooxidación de pirogalol. La mezcla de ensayo contenía 5,0 ml Tris HCl (pH 8,2, 0,05 M) tampón, solución de pirogalol 0,1 mM, 2,5 solución de SOD nM y diferentes concentraciones de INH. La concentración de INH varió de 0 a 2,4 mM. La absorción a 325 nm a 303 K contra el tiempo fue grabado usando un espectrofotómetro. La actividad de la SOD se determinó como la tasa de pirogalol auto-oxidación. Conclusiones En este documento, la interacción entre el INH y SOD fue estudiada mediante fluorescencia y espectroscopia ultravioleta a diferentes temperaturas bajo condiciones fisiológicas imitados. Los resultados muestran que el mecanismo de extinción de la fluorescencia de SOD por INH es un proceso de enfriamiento estático. Las constantes de unión, los sitios de unión y los correspondientes parámetros termodinámicos (H. G y S) se determinaron, lo que indica que las fuerzas de enlace de hidrógeno y de van der Waals juegan un papel importante en el proceso de unión. Según la teoría de Förster de transferencia de energía nonradiation, la distancia de unión entre Cu / Zn-SOD y INH es 3,93 nm y la transferencia de energía se produce entre SOD y INH con alta probabilidad. UVvis, fluorescencia sincrónica y estudios de fluorescencia tridimensionales indica que la interacción conduce a un cambio en la conformación y microambiente de Cu / Zn-SOD. Por otra parte, la determinación de la actividad de SOD en diferente INH concentración conduce a la conclusión de que la unión de INH con SOD no afecta a la actividad de la Cu / Zn-SOD. Este informe tiene un significado especial en farmacología clínica y la medicina, así como la metodología. Declaraciones Reconocimiento Este trabajo fue apoyado financieramente por la zona del Mar Internacional de Estudio y Desarrollo del Plan 12 de Cinco Años de Recursos de China (DY125-15-E-01), la Fundación de Ciencia Natural de China (20971024) y las instituciones clave Educación Superior Fundación de Ciencia natural de Anhui (kj2009A127). Autores archivos presentados originales de las imágenes A continuación se presentan los enlaces a los autores originales presentados archivos de imágenes. Conflicto de intereses Los autores declaran que no tienen intereses en competencia. Autores de las contribuciones ND hicieron una contribución significativa a la adquisición de datos, análisis y preparación de manuscritos. XH ha hecho una contribución sustancial al diseño y análisis de datos experimentales. ZL y HX participaron en los experimentos parciales. LS hicieron una contribución significativa al diseño experimental, análisis de datos, y la revisión del manuscrito. SC participó en el diseño del estudio y revisión del manuscrito. Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito final. Los autores Afiliaciones Colegio de Química e Ingeniería Química, Universidad de Fuyang Colegio Normal de Química e Ingeniería Química, Universidad de Anhui Referencias Iyawoo K: La tuberculosis en Malasia: problemas y perspectivas de tratamiento y control. Tuberculosis. 2004, 84: 4-7. 10.1016 / j. tube.2003.08.014. Ver el artículo Prasad B, Singh S: LCMS / TOF y UHPLCMS / MS estudio del destino in vivo de hidrazona isonicotinil rifamicina formado en la co-administración oral de rifampicina e isoniazida. J Biomed Pharmaceut. 2010, 52: 377-383. 10.1016 / j. jpba.2009.07.014. Ver el artículo Verma RK, Mukker JK, Singh RSP, Kumar K, Verma PRP, Misra A: biodistribución parcial y la farmacocinética de la isoniazida y la rifabutina siguientes suministro pulmonar de micropartículas inhalables a los macacos rhesus. Mol Pharm. 2012, 9: 1011-1016. 10.1021 / mp300043f. 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